瑞典Attana公司制造的Attana Cell 200蛋白互作分析儀，是一種無需標(biāo)記、可直接在細胞表面測量分子相互作用的生物傳感器，其填補了傳統(tǒng)生物傳感器與基于細胞的分析方法之間的空白。

Attana蛋白互作分析儀依托于石英晶體微天平（Quartz Crystal Microbalance，簡稱QCM）技術(shù)，外加的交流電勢使石英晶體在共振頻率下震動，當(dāng)分子流經(jīng)晶體并與表面結(jié)合，振動頻率會發(fā)生變化，其頻率差異可以用來反映實時的分子相互作用。

自2010年上市以來，Attana Cell 200蛋白互作分析儀已廣泛用于蛋白互作、蛋白細胞互作、抗體藥研發(fā)等領(lǐng)域，贏得了包括大學(xué)、藥企、CRO實驗室的信任，與制藥化工巨頭Lonza集團、胰島素研發(fā)明星諾和諾德等長期合作。

相比傳統(tǒng)分子互作檢測技術(shù)，Attana開創(chuàng)了直接在細胞層面進行實時原位分子結(jié)合動力學(xué)的檢測方法，更準(zhǔn)確地反映了體內(nèi)環(huán)境的分子間互作，能夠高質(zhì)量、精確地研究其特異性、動力學(xué)和親和力。

Attana Cell 200蛋白互作分析儀檢測優(yōu)勢

1、可檢測蛋白與細胞的相互作用
2、可檢測蛋白與組織切片的相互作用
3、可檢測細胞與細胞的相互作用
4、可使用粗制蛋白樣品

Attana蛋白互作分析儀應(yīng)用實例

用QCM技術(shù)檢測蛋白藥物與腫瘤組織切片的親和動力學(xué)

長久以來，將癌癥組織用甲醛固定石蠟包埋（FFPE）后做組織切片，進行免疫組化（IHC）分析，是癌癥相關(guān)抗原的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。但免疫組化本身很難定量抗體與癌癥相關(guān)抗原結(jié)合的特異性和親和力。Clausen等人建立了一套以Attana Cell 200 QCM技術(shù)為核心，直接在組織切片上進行實時原位分子親和動力學(xué)的檢測方法。

研究者直接在FFPE人胎盤組織、乳腺癌和前列腺腫瘤標(biāo)本中，測定了rVAR2蛋白與它的胎盤樣硫酸軟骨素（pl-CS）受體之間的相互作用，發(fā)現(xiàn)rVAR2與FFPE人胎盤、腫瘤組織存在納摩爾級的親和力，與pl-CS陰性的正常組織無相互作用。

進一步用雄激素受體N-20的抗體（抗AR）對此方法進行評估，發(fā)現(xiàn)Attana得出的KD值與可用抗原表位的數(shù)量無關(guān)，表明Attana不僅能在組織標(biāo)本上直接對抗原-抗體結(jié)合親和力進行定量，還能評估抗體所能識別的抗原表位的數(shù)量。

基于這些結(jié)果，研究者認(rèn)為Attana QCM技術(shù)不僅可用于挑選最佳生物制劑，還能用于開發(fā)新型高親和力的藥物。（Clausen, T. M., et al. Real-time and label free determination of ligand binding-kinetics to primary cancer tissue specimens; a novel tool for the assessment of biomarker targeting. Sens Biosensing Res. 2016; 9: 23-30.）

圖1.Attana Cell 200蛋白互作分析儀與COP-1檢測芯片。

圖2.免疫組化鑒定為陽性的甲醛固定石蠟包埋組織樣品被切成5μm厚的薄片，并固定在COP-1芯片中心。 

圖3.（b）Attana測定出rVAR2蛋白與胎盤組織的KD值為4.27nM，具有高親和力。（c）當(dāng)添加了能抑制rVAR2粘附于胎盤組織的CSA溶液后，rVAR2蛋白與胎盤組織的結(jié)合曲線不再有明顯的結(jié)合點和解離點。

圖4.（a）免疫組化結(jié)果顯示，與作為正常組織對照的扁桃體組織切片相比，rVAR2蛋白與乳腺癌、前列腺腫瘤組織切片有強相互作用，進一步用Attana測定其KD值分別為8.9nM和6.65nM，而與扁桃體組織的結(jié)合曲線無明顯的結(jié)合點和解離點，無法測出其KD值。（b和c）用V5-FITC的抗體對rVAR2蛋白進行定位，進一步驗證了Attana得到的結(jié)果，即rVAR2蛋白與前列腺腫瘤組織切片強結(jié)合，而不與扁桃體組織結(jié)合。證明Attana能準(zhǔn)確對組織切片上抗原-抗體的親和力進行定性和定量。

 
圖5.檢測發(fā)現(xiàn)純化的胎盤樣硫酸軟骨素（pl-CS）受體與rVAR2蛋白的KD值為3.6nM，具有強結(jié)合，證明Attana可準(zhǔn)確檢測純化蛋白間的相互作用。

圖6.將乳腺癌細胞(SKBR3)、前列腺癌細胞(LNCap)與中國倉鼠卵巢細胞（CHO）相比，免疫組化和Attana的結(jié)果一致，乳腺癌細胞與前列腺癌細胞均檢測到細胞與rVAR2蛋白有著很強的親和力。

圖7.高表達AR的Lncap細胞與AR抗體有強的親和力，而雄激素非依賴的PC3與AR抗體的親和力相對較弱。這一結(jié)果進一步在細胞水平上證明了Attana具有廣泛的兼容性。

圖8.采用Attana對AR抗體與FFPE組織切片的親和力檢測結(jié)果，與免疫組化結(jié)果一致，即免疫組化陽性的FFPE前列腺癌組織，對AR抗體有強的親和力，免疫組化陰性的FFPE胎盤組織，對AR抗體無相互作用。這一結(jié)果在組織切片水平上也證明了Attana能有效監(jiān)測抗體與切片的結(jié)合。

實驗操作總結(jié)：
1、組織切片如何固定在COP-1芯片上？
Attana的COP-1芯片在室溫用聚L-賴氨酸溶液包被5分鐘。包被后，用PBST沖洗芯片，并在室溫干燥2小時。將甲醛固定石蠟包埋（FFPE）組織樣品切成5μm厚的薄片，并貼在芯片上，60℃烘烤1h。

2、脫蠟和抗原修復(fù)
將COP-1芯片上的組織樣品浸沒在EZprep溶液中，65℃水浴30min進行脫蠟。之后PBS洗3次。再在95℃下，用pH6.0的10mM檸檬酸鈉、0.05％吐溫溶液浸泡30min進行抗原修復(fù)。